Πώς να υπολογίσει Συγκέντρωση Αντισώματος

Μία από τις πιο κοινές μεθόδους υπολογισμού μιας συγκεντρώσεως πρωτεΐνης σε ένα εργαστηριακό περιβάλλον είναι η χρήση ενός Δοκιμασία Bradford . Το Αντιδραστήριο Bradford είναι μια χρωματομετρική αντιδραστήριο το οποίο αλλάζει χρώμα με βάση την συγκέντρωση πρωτεΐνης. Συνδυάζοντας μια γνωστή πρότυπη καμπύλη με την αντιδραστηρίου Bradford , μπορείτε να δημιουργήσετε ένα μέτρο κατά το οποίο μπορείτε να υπολογίσετε τη συγκέντρωση της κάθε πρωτεΐνης , συμπεριλαμβανομένων antibodies.Things Θα πρέπει
καθορισθέν αντίσωμα σε ένα γνωστό ρυθμιστικό
Ρυθμιστικό ταιριάζουν με το αναστολή του αντισώματος
Lyophilized αλβουμίνη βόειου ορού ( BSA )
Microcentrifge σωλήνες
Εργαστήριο στυλό
περιδινητή
εργαστηριακής κλίμακας
ζύγισης χαρτί
1ml πιπέτα
Bradford αντιδραστηρίου
Multi- φρεατίων
Colorimetric ανάγνωσης πλάκας
Microsoft Excel
βιβλίο Lab
Pen
Η Εμφάνιση Περισσότερες οδηγίες
Δημιουργήστε ένα πρότυπο

1

Μέτρο 200 mg της BSA για χαρτί βάρους χρησιμοποιώντας μια εργαστηριακή κλίμακα . Να επισυναφθούν σε ένα σωλήνα μικροφυγοκέντρησης . Προστίθενται 2 ml του ρυθμιστικού διαλύματος στο σωληνάριο μικροφυγοκέντρου που περιέχει τα 200 mg BSA. Ονομάστε αυτό το σωλήνα " 1 " 2

Vortex Tube 1 μέχρι την BSA διαλυθεί πλήρως .
Εικόνων 3

Κατάργηση 500 ul από την BSA σε ρυθμιστικό και μεταφορά σε ένα δεύτερο σωλήνα . Ονομάστε αυτό το σωλήνα " 2 " Προσθέστε 500 ul απλό ρυθμιστικό με Tube 2
Η 4

Κατάργηση 200 ul της BSA σε ρυθμιστικό από Tube 1 και το μεταφέρουμε σε ένα νέο σωλήνα . Ονομάστε αυτό το σωλήνα " 3 " Προσθέστε 800 ul απλό ρυθμιστικό με Tube 3
5

Κατάργηση 100 ul της BSA σε ρυθμιστικό από Tube 1 και το μεταφέρουμε σε ένα νέο σωλήνα . Ονομάστε αυτό το σωλήνα " 4 " Προσθέστε 900 ul απλό ρυθμιστικό με Tube 4
Η 6

Κατάργηση 10 ul της BSA σε ρυθμιστικό από Tube 1 και το μεταφέρουμε σε ένα νέο σωλήνα . Ονομάστε αυτό το σωλήνα " 5 " Προσθέστε 990 ul απλό ρυθμιστικό με Tube 5. σωλήνες 1 5 περιλαμβάνει μια διαβαθμισμένη σειρά προτύπων . Ο πρώτος σωλήνας έχει μία γνωστή συγκέντρωση 100 mg /ml ? η δεύτερη , 50 mg /ml ? η τρίτη , 20 mg /ml, ο τέταρτος , 10 mg /ml ? και η πέμπτη , 1 mg /ml . Κάθε σωλήνας περιέχει περίπου 1 ml διαλύματος .
Εικόνων Δημιουργία αντισωμάτων αραιώσεις
Η 7

Προσθέστε 5 0UL καθαρισμένου αντισώματος σε 95 0UL ρυθμιστικού . Ονομάστε αυτό το σωλήνα " Α " καλής ποιότητας 8

Προσθέστε 10 ul του καθαρισμένου αντισώματος σε 990 ul ρυθμιστικού . Ονομάστε αυτό το σωλήνα " Β "
Η 9

Προσθέστε 2 ul καθαρισμένου αντισώματος σε 998 ul ρυθμιστικού . Ονομάστε αυτό το σωλήνα " Γ "
εικόνων Τοποθετήστε την πλάκα

10

Τοποθετήστε 0,5 ml από απλό ρυθμιστικό με τα πρώτα πηγάδια σε δύο στήλες του δίσκου πολλών οπών .

11

Τοποθετήστε 0,5 ml των περιεχομένων του σωλήνα 1 στον δεύτερο φρεάτια των δύο πρώτες στήλες του πλάκα με πολλές εκβαθύνσεις . Συνεχίστε προς τα κάτω τη διαβαθμισμένη σειρά έως ότου οι δύο πρώτες στήλες περιέχουν 0,5 ml από ένα πρότυπο διάλυμα BSA από κάθε Σωλήνες 1-5 , συμπεριλαμβανομένων των φρεατίων για απλό ρυθμιστικό .
Η 12

Προσθέστε 0,5 ml του αντιδραστηρίου Bradford σε κάθε καλά . Ανακινήστε την πλάκα για να αναμειχθεί το αντιδραστήριο με τα πρωτεϊνούχα διαλύματα , προσέχοντας να μη χυθεί το περιεχόμενο οποιουδήποτε από τα πηγάδια . Περιμένετε 5 λεπτά . Κόσμο
13

Διαβάστε την πλάκα , σύμφωνα με το πρωτόκολλο ειδικά για τη συσκευή ανάγνωσης πλάκας σε μήκος κύματος 595 nm .
Εικόνων Υπολογίστε αντισωμάτων Συγκέντρωση

14

Αντιγράψτε τις τιμές που διαβάζονται από τον αναγνώστη πλάκα στο Microsoft Excel .
Η 15

Δημιουργήστε ένα γράφημα από τις δύο στήλες των αξιών που αντιπροσωπεύει το πρότυπο BSA χρησιμοποιώντας τον Οδηγό γραφήματος στο Microsoft Excel .

16

Σχεδιάζει τα σημεία που μετρήθηκαν από τις αραιώσεις αντισώματος στο γράφημα του Excel . Διαβάστε την αντίστοιχη συγκέντρωση της πρωτεΐνης σύμφωνα με την αξία του y - άξονα για το σημείο αραίωση αντισώματος στο γράφημα του Excel .
Η 17

Ανάλογα με το αν είστε χρησιμοποιώντας τις τιμές που λαμβάνονται από το μετρό Α , Β ή C , πολλαπλασιάστε την τιμή είτε με 20 , 40 ή 500 , αντίστοιχα . Η προκύπτουσα τιμή είναι η συγκέντρωση του καθαρισμένου αντισώματος σας .
Εικόνων