GSH Δοκιμασία Πρωτόκολλα

γλουταθειόνη ή GSH είναι μία πρωτεΐνη που απαντάται στα δύο φυτά και τα ζώα . Λειτουργεί για να βοηθήσει ενζυμικές αντιδράσεις στην αποτοξίνωση των περιβαλλοντικών ρύπων . Επιπλέον , διευκολύνει τη μεταφορά αμινοξέων μέσα στα κύτταρα και βοηθά στη διατήρηση αντιδράσεις αναγωγής σουλφυδρυλίου πρωτεΐνης. Πρωτόκολλα GSH Δοκιμασία χρήση GSH ρυθμιστικά διαλύματα, πρότυπα, υπόστρωμα , ένζυμα και αντιδραστήρια . Μετά από τη συγκεκριμένη διαδικασία είναι σχετικές με την έκβαση της δοκιμασίας . Η ενζυματική μέθοδος ανακύκλωσης
Η

Η ενζυματική μέθοδος ανακύκλωσης , για την GSH , χρησιμοποιεί αναγωγάση της γλουταθειόνης για την ποσοτικοποίηση GSH . Το πρωτόκολλο αυτό είναι ειδικά για το πλάσμα , δείγματα ιστών ή καλλιεργημένων κυττάρων. Προσθέστε το ϋΤΝΒ αντιδραστηρίου ( 5 - 5'- διθειο-δις- 2 -νιτροβενζοϊκό οξύ ) προς GSH . Η ομάδα σουλφυδρυλίου σε GSH αντιδρά με το αντιδραστήριο και παράγει ένα κίτρινο οξύ που ονομάζεται 5 -θειο- 2 -νιτροβενζοϊκού οξέος ( ΤΝΒ) . Προσθήκη ρεδουκτάση γλουταθειόνης στο οξύ και GSH μίγμα να ανακυκλώνουν GSH και παράγουν περισσότερο οξύ. Στη διαδικασία αυτή, ο ρυθμός παραγωγής οξέος είναι ανάλογη με την αντίδραση ανακύκλωσης της GSH ? Ως εκ τούτου , μετράται η απορρόφηση του οξέος ΤΝΒ χρησιμοποιώντας ένα φασματοφωτόμετρο . Η απορρόφηση παρέχει μια εκτίμηση του πραγματικού ποσού της γλουταθειόνης στο δείγμα .
Εικόνων ήπατος κυττάρων Γλουταθιόνη Δοκιμασία
Η

Το πρωτόκολλο αυτό αναλύει το ποσό της γλουταθειόνης στο ανθρώπινο hepatocarcinoma (καρκίνος του ήπατος ) κύτταρα . Για τη διεξαγωγή αυτής της διαδικασίας , χρησιμοποιήστε τη χρωματομετρική μέθοδος για τον προσδιορισμό GSH να μειώσει και να οξειδώνουν GSH . Μείωση GSH χρησιμοποιώντας 5 -5'- διθειοδις ( 2 -νιτροβενζοϊκό οξύ ή ϋΤΝΒ ) προς σχηματισμό του

έγχρωμο προϊόν 2 -νιτρο- 5 - θειοβενζοϊκό οξύ και οξειδωμένη γλουταθειόνη ( GSSG) . Χρησιμοποιήστε αναγωγάση της γλουταθειόνης για τη μείωση των GSSG σε GSH σχηματίσει και πάλι . Για να μετρήσει την ποσότητα της γλουταθειόνης στα ηπατικά κύτταρα , διαβάστε το δείγμα σε 415 απορρόφηση κινητικά σε μια συσκευή ανάγνωσης μικροπλάκας .

Η απόπτωση των κυττάρων
Η

Σε αυτό το πρωτόκολλο , GSH χρησιμοποιείται για την ανίχνευση κυτταρικής απόπτωσης ( θάνατος) μέσω της μέτρησης της μείωσης στην μειωμένη GSH . Μια μείωση στη συγκέντρωση της κυτταρικής GSH είναι ένας δείκτης του κυτταρικού θανάτου . Χρώση των κυττάρων του δείγματος με μη φθορίζουσα thiolite πράσινο . Το πράσινο thiolite συσσωρεύεται στο κυτοσόλιο (κύτταρο πλάσματος) και τα μιτοχόνδρια ( εργοστάσιο παραγωγής ηλεκτρικού ρεύματος ) του κυττάρου . Χρησιμοποιήστε κυτταρομετρία ροής σε 490/520 νανόμετρα για να απεικονίσει το ποσό της γλουταθειόνης στα κύτταρα .
Εικόνων Σύνολο Συγκέντρωση γλουταθειόνης στον ζώων και των φυτών Δείγματα
Η

Μετρήστε τη συγκέντρωση του συνολική GSH τόσο στην ανηγμένη και οξειδωμένη μορφή σε διαφορετικά δείγματα ζώων και φυτών. Προσθέστε το γενικό αντιδραστήριο θειόλης , 5 -5'- διθειοδις [ 2 -νιτροβενζοϊκό οξύ ] . Το αντιδραστήριο θειόλης αντιδρά με GSH για να σχηματίσει 412 nm χρωμοφόρο , 5 - thionitrobenzoic οξύ ( ΤΝΒ) και GS -ΤΝΒ . Προσθήκη ρεδουκτάση γλουταθειόνης και βήτα - φωσφορικού νικοτιναμιδο-αδενινο -δινουκλεοτιδίου ( NADPH ) για να μειώσει GS- ΤΝΒ . Η γλουταθειόνη θα κυκλοφορήσει επίσης ένα δεύτερο μόριο TMB και ανακυκλώνουν το GSH . Επιπλέον , οποιαδήποτε οξειδωμένη GSH ( GSSG) υπάρχει στο μίγμα fromed από την αντίδραση δισουλφιδίου μειώνεται επίσης προς GSH . Χρησιμοποιήστε μια συσκευή ανάγνωσης μικροπλάκας στα 405 νανόμετρα να διαβάσει το επίπεδο απορρόφησης και να αναφέρει τη συνολική συγκέντρωση της GSH .
Η
εικόνων