Μέθοδοι για ένα ζυμομύκητα Τρεις Hybrid System

αναπαραγωγή των χρωμοσωμάτων , την επεξεργασία του αγγελιαφόρου RNA, μετάφραση των πρωτεϊνών , και κρίσιμες αποφάσεις στα πρώτα στάδια της ανάπτυξης εξαρτάται από την αλληλεπίδραση του DNA, RNA και πρωτεϊνών . Αυτές οι αλληλεπιδράσεις είναι οι βασικές βιολογικές διεργασίες της γονιδιακής έκφρασης και την πρωτεϊνική σύνθεση . Οι επιστήμονες χρησιμοποιούν συχνά Saccharomyces cerevisiae , το ίδιο είδος της μαγιάς που χρησιμοποιείται στην αρτοποιία και στη ζυθοποιία , για τη μελέτη των γονιδίων που κωδικοποιούν για τις συγκεκριμένες πρωτεΐνες και να αναλύσει τις αλληλεπιδράσεις μεταξύ των πρωτεϊνών και άλλων μορίων . Η μαγιά τριών υβριδίων σύστημα είναι μία από τις τρεις παραλλαγές του ζυμομύκητα δύο-υβριδίων σύστημα που χρησιμοποιείται για τη μελέτη αυτών των αλληλεπιδράσεων . Το σύστημα δύο υβριδίων
Η

Ο δύο-υβριδίων μέθοδος χρησιμοποιείται για την ανίχνευση αλληλεπιδράσεων πρωτεΐνης-πρωτεΐνης με την εξέταση για την έκφραση ενός γονιδίου ανταποκριτή. Πολλές πρωτεΐνες έχουν τουλάχιστον δύο τομείς, ή διακριτές δομικές και λειτουργικές μονάδες. GAL4 , μια πρωτεΐνη που βρίσκεται σε Saccharomyces cerevisiae , έχει έναν τομέα δέσμευσης DNA ( DBD ) και ένα πεδίο ενεργοποίησης ( Αϋ ) . Σε αυτή τη μέθοδο, μία υβριδική πρωτεΐνη συντήκεται με το DBD και ένα δεύτερο στην AD . Κανένα γονίδιο ανταποκριτή εκφράζεται με τη σύντηξη ενός μόνο από τα υβρίδια . Δεδομένου ότι το γονίδιο GAL4 δημοσιογράφος εκφράζεται μόνο όταν και οι δύο υβρίδια υπάρχουν , αλληλεπίδραση πρωτεΐνης-πρωτεΐνης ενδείκνυται . Εικόνων
The Three - Hybrid Οι τρεις - υβριδική μέθοδος προσδιορίζει
Σύστημα

ένα γονίδιο ανταποκριτή για να ανιχνεύσει την αλληλεπίδραση της πρωτείνης με το RNA . Η πρώτη υβριδική πρωτεΐνη αποτελείται από ένα DBD συντηγμένο άμεσα με ένα πεδίο σύνδεσης RNA. Η δεύτερη συνίσταται στην Αϋ του παράγοντα μεταγραφής GAL4 συνδέεται με μια πρωτεΐνη σύνδεσης RNA . Οι περιοχές δέσμευσης RNA αλληλεπιδρούν με ένα υβριδικό μόριο του RNA που συνδέει τις δύο υβριδικές πρωτεΐνες για να σχηματίσει ένα σύμπλοκο . Σχηματισμός του συμπλόκου ενεργοποιεί την έκφραση του γονιδίου ανταποκριτή GAL4 . Δεδομένου ότι το γονίδιο αναφοράς είναι ενεργοποιημένη μόνο με τη δημιουργία των τριών υβριδικών συγκρότημα , η παρουσία της δείχνει την αλληλεπίδραση του RNA και πρωτεϊνών .

Η The One - Hybrid System

το ένα - υβριδική μέθοδος χρησιμοποιείται για να ανιχνεύσει την αλληλεπίδραση της πρωτεΐνης με το DNA. Μια μοναδική υβριδικό σύστημα συνδυάζει μια μοναδική πρωτεΐνη , η οποία συνδέει το AD άμεσα με την DBD . Αντί να εντοπίσει ένα γονίδιο ανταποκριτή, η μέθοδος αυτή φαίνεται για μια συγκεκριμένη πρωτεΐνη που πρέπει να αναγνωρίζουν μία αλληλουχία -στόχο του DNA. Η παρουσία της ειδικής πρωτεΐνης υποδεικνύει την αλληλεπίδραση της πρωτεΐνης με το DNA. Εικόνων
Το One- Hybrid System Δύο
Η

Το ένα-δύο υβριδική μέθοδος χρησιμοποιείται για τη μελέτη πρωτεϊνών - πρωτεΐνης και πρωτεΐνης -ΟΝΑ αλληλεπιδράσεις ταυτόχρονα. Χρησιμοποιώντας αναπτύχθηκαν πρόσφατα στελέχη ζύμης , η μέθοδος αυτή χρησιμοποιεί το γονίδιο GAL4 ανταποκριτή για τον εντοπισμό αλληλεπιδράσεων πρωτεΐνης-πρωτεΐνης και μία συναίνεση για τον προσδιορισμό ρ53 αλληλεπίδρασης πρωτεΐνης -ϋΝΑ. Η μέθοδος αυτή αναμένεται να αυξήσει σημαντικά την ακρίβεια των πειραματικών αποτελεσμάτων με τη μείωση της εμφάνισης των false positives που αποκτήθηκαν σε άλλα υβριδικά συστήματα .
Η
εικόνων