Πώς να εξαγάγει το DNA Από τα φύλλα των φυτών

Plant οργανική ύλη αποτελείται από πολλά κύτταρα , καθένα από τα οποία περιέχουν το DNA που κρατά τις οδηγίες για την ανάπτυξη και τη λειτουργία. Οι επιστήμονες μπορούν να επιθυμούν να σπουδάσουν μέρος ή το σύνολο του γενετικού υλικού που υπάρχει στα κύτταρα , και έτσι πρέπει να εξαγάγετε με ασφάλεια το DNA από το δομικό υλικό των κυττάρων και μηχανήματα που περιβάλλει it.Things Θα πρέπει
2 γραμμάρια φύλλα
γουδοχέρι και γουδί
Φυγόκεντρος
Υδατόλουτρο
Υπόλοιπο
Γάζα
Φυγοκεντρείστε Έξι 15ml
Ένα 1,5 ml σε σωλήνα Eppendorf
100ml CTAB ρυθμιστικό εκχύλισης
2 ml Βήτα - μερκαπτοαιθανόλης
7ml 24 : 1 χλωροφόρμιο: ισοαμυλική αλκοόλη μίγμα
50 μικρολίτρα ΚΝΑσης Α σε συγκέντρωση 10 mg /ml
Σιφώνια
6ml ισοπροπανόλης
2ml 70 % Αιθανόλη
1mL αποστειρωμένο απιονισμένο νερό

Εμφάνιση Περισσότερες οδηγίες
Η 1

Γεμίστε το υδατόλουτρο με το συνιστώμενο επίπεδο με νερό , το οποίο ποικίλλει ανάλογα με τις προδιαγραφές του κάθε κατασκευαστή , και ενεργοποιήστε την . Ρυθμίστε το υδατόλουτρο στους 65 βαθμούς Κελσίου και αφήστε το να έρθει σε θερμοκρασία . Τοποθετήστε το δοχείο ισοπροπανόλης σε πάγο . Ρυθμίστε τη φυγόκεντρο στις 3000 στροφές ανά λεπτό , σε θερμοκρασία 20 βαθμών Κελσίου . 2

Ζυγίζονται 2 g αφήνει σε μια ισορροπία και τοποθετήστε τα σε ένα γουδί . Προσθέστε αρκετό βήτα -μερκαπτοαιθανόλη με πιπέτα σε ένα δοχείο του ρυθμιστικού διαλύματος εκχύλισης , ώστε το τελικό προϊόν αποτελείται από ένα έως δύο τοις εκατό των βήτα -μερκαπτοαιθανόλη. Για παράδειγμα , εάν έχετε έναν όγκο του ρυθμιστικού που μετρά περίπου 100 ml , στη συνέχεια, προσθέστε 2 ml β - μερκαπτοαιθανόλης στο δοχείο και αναμίξτε καλά .
Εικόνων 3

Με τη βοήθεια σιφωνίου διάλυμα εκχύλισης 7 ml στο κονίαμα . Κονιοποιείται το μίγμα σε ένα ομοιογενές υγρό με τον ύπερο.
Η 4

Διπλώστε ένα κομμάτι τουλπάνι πάνω για να σχηματίσει τέσσερα στρώματα . Στέλεχος και πιέστε το υγρό μέσα από τα στρώματα σε μια 15 - ml σωλήνα φυγοκέντρησης .
5

Τοποθετήστε το σωλήνα στο υδατόλουτρο για 30to 60 utes λεπτά . Ανακινήστε ελαφρά το σωληνάριο για να αναμειχθεί το περιεχόμενο της κάθε τέταρτο της ώρας . Αφήστε το σωλήνα να κρυώσει σε θερμοκρασία δωματίου , μετά το πλήρες χρονικό διάστημα είναι μέχρι .
Η 6

Συμπληρώστε το σωλήνα με το χλωροφόρμιο και ισοαμυλοαλκοόλης μείγμα ( αυτό περιλαμβάνει 24 μέρη χλωροφορμίου σε ένα μέρος ισοαμυλαλκοόλη ) , έτσι ώστε η σωλήνας περιέχει περίπου το ήμισυ του δείγματος και το ήμισυ της νέας προσθήκη υγρού . Κλείστε το σωλήνα και γυρίστε το ανάποδα μερικές φορές αργά, έτσι ώστε τα υγρά μίγματα .
Η 7

Βάλτε το σωλήνα στη φυγόκεντρο και αφήστε το να γυρίσετε για 10 λεπτά .
8

Τοποθετήστε 50 ml ΚΝΑσης Α σε ένα νέο σωλήνα φυγοκέντρου. Φέρεται με σιφώνιο το υπερκείμενο ( το διαυγές στρώμα στην κορυφή του σωλήνα πάνω από ένα λευκό στρώμα από μπάζα ) στον πρώτο σωλήνα μακριά και να κινηθεί αυτό προς το δεύτερο σωλήνα. Κλείστε το σωλήνα και να αναστρέφεται μερικές φορές για να αναμειχθούν τα περιεχόμενα μαζί . Κρατήστε το σωλήνα σε θερμοκρασία δωματίου για μια ώρα .
Η 9

Εκτελέστε τα βήματα 6 και 7 ξανά δύο φορές έτσι ώστε να έχετε μια σαφή σωλήνα δείγματος . Στη συνέχεια φέρεται με σιφώνιο έως 9 ml από το διαυγές υγρό από τον τελικό σωλήνα σε ένα νέο σωλήνα . Προσθήκη 6 ml ισοπροπανόλης και αναστρέψτε το σωλήνες 10 φορές με ήπιο τρόπο , ώστε το DNA πέφτει έξω από το διάλυμα και σε στερεά μορφή . Τότε Φυγοκεντρήστε το σωλήνα για 10 λεπτά , τα οποία θα πρέπει να δημιουργήσει ένα σφαιρίδιο του DNA στον πυθμένα του σωλήνα .
Η 10

Αποχύνεται το υγρό μέσα στο σωλήνα έτσι ώστε το σφαιρίδιο παραμένει . Μεταφέρονται με σιφώνιο σε 2 ml 70 % αιθανόλης και τον τόπο πίσω στο φυγόκεντρο για πέντε λεπτά . Αδειάστε το υγρό μέρος και πάλι . Χρησιμοποιήστε μια αποστειρωμένη πιπέτα για να πάρει το ίζημα και να προχωρήσουμε σε ένα αποστειρωμένο 1,5 ml σωλήνα Eppendorf . Πιπέτα σε 200 μικρολίτρα στείρου απιονισμένου νερού και αφήστε το DNA διαλύονται εντελώς στο υγρό , το οποίο μπορεί να λάβει όλη τη νύκτα. Το δείγμα είναι έτοιμο για ανάλυση .
Εικόνων