Τον τρόπο αντιμετώπισης ενός Primer Dimer

Η αντίδραση αλύσου πολυμεράσης , ή PCR , είναι μια τεχνική στην μοριακή βιολογία χρησιμοποιήθηκαν για να ενισχύσουν ειδικές περιοχές του DNA. PCR εξαρτάται από εκκινητές , που είναι σύντομες κλώνους του DNA που είναι συμπληρωματικά και ειδικά για το DNA του ενδιαφέροντος . Ενώ εκκινητών γενικά θα συνδέονται με το DNA που ταιριάζουν ακολουθία τους , περιστασιακά θα δεσμεύσει και να ενισχύουν η μία την άλλη , προκαλώντας το φαινόμενο που είναι γνωστό ως αστάρι dimer.Things Θα πρέπει
Primer ακολουθίες

Εμφάνιση Περισσότερες οδηγίες

1

Εξετάστε το περιεχόμενο GC ( αριθμός των G και C ) σε αλληλουχία του εκκινητή σας . GC συγκόλληση είναι ισχυρότερη από ό, τι συγκόλληση , λόγω του επιπλέον δεσμού υδρογόνου μεταξύ του γουανίνη και κυτοσίνη . Βέλτιστη πρόσφυση είναι τουλάχιστον 50 τοις εκατό περιεκτικότητα σε GC . 2

Εξετάστε τη θερμοκρασία ανόπτησης από την αντίδρασή σας . Χαμηλές θερμοκρασίες ανόπτησης , γενικά ορίζεται ως 55 C ή κάτω , μπορεί να προκαλέσει μη-ειδική πρόσδεση του εκκινητή , η οποία μπορεί να προκαλέσει εκκινητή διμερή εκτός από την ενίσχυση των εσφαλμένων γονιδιωματικών τμημάτων.
Εικόνων 3

Διπλή -Ελέγξτε την ποσότητα και τη συγκέντρωση των εκκινητών που έχετε προσθέσει στο PCR . Μια υπέρβαση των εκκινητών , γενικά περισσότερο από 75 picomoles , μπορεί να προκαλέσει αστάρι διμερή , καθώς και .
Εικόνων