Πώς να προσδιορίσει Gram θετικά ραβδία

Από το 1880 , η δοκιμή χρώση Gram παραμένει μια σημαντική μέθοδος της βακτηριακής αναγνώρισης και ταξινόμησης . Μικροβιολόγοι συχνά εκτελεί τη δοκιμή Gram ως το πρώτο βήμα για τον προσδιορισμό συγκεκριμένων τύπων ραβδοειδούς βακτήρια από το γένος Bacillus . Gram χρώση είναι το όνομά του για τον εφευρέτη του, της Δανίας bacteriologist Hans Christian Gram . Η τεχνική λειτουργεί εξαιτίας μιας διαφοράς σε gram θετικά και gram αρνητικά βακτήρια φυσιολογία κυτταρικού τοιχώματος. Ορισμένες gram θετικά ραβδία να προκαλέσει σοβαρές ασθένειες όπως ο άνθρακας και tetanus.Things Θα πρέπει
Lab ρούχα
Γάντια
παπουτσιών καλύμματα
Χύτρα
βακτήρια αποικία
Agar
Petri πιάτα
Νερό
Εμβολιασμός βρόχο
Γυάλινο slide
μεθανόλη
καυστήρας Bunsen
κρύσταλλο ιώδες λεκέ
Ιώδιο κηλίδα αντιδραστηρίου
Decolorizer
Safranin
λύση Fuchsin
απορροφητικό χαρτί
μικροσκόπιο
Η Εμφάνιση Περισσότερες οδηγίες
Η 1

Ασφαλίστε τη χρήση ενός καθαρού , ασηπτική εργαστηριακό χώρο για τη διεξαγωγή της δοκιμής χρώση κατά Gram . Να φοράτε καθαρά ρούχα εργαστήριο και καλύμματα υποδημάτων για την πρόληψη της μόλυνσης . Χρησιμοποιήστε γάντια και μάσκα όταν χειρίζεστε καλλιέργειες βακτηρίων . Απομονώστε μια αποικία βάκιλοι για τη δοκιμή σας και να αναπτυχθούν έξω σε πλούσια σε θρεπτικά συστατικά άγαρ σε τρυβλία Petri . Αποστείρωση των τρυβλία Petri και άγαρ με τη χύτρα ταχύτητας πριν από τη χρήση . 2

Προσθέστε μερικές σταγόνες καθαρό νερό στο πιάτο του πολιτισμού . Διανείμει ομοιόμορφα πάνω στο άγαρ . Σύρετε ένα βρόχο εμβολιασμού ελαφρά όλη την επιφάνεια του άγαρ του . Μεταφέρετε το δείγμα πάνω σε ένα καθαρό γυάλινο slide και Παπανικολάου ομοιόμορφα σε κυκλική περιοχή στο μέγεθος μιας δεκάρας . Κρατήστε το μέγεθος του δείγματος ελάχιστη? θα πρέπει να είναι μόλις και μετά βίας μπορούν να το δουν με γυμνό μάτι .
εικόνων 3

Εφαρμόστε το 95 τοις εκατό μεθανόλη πάνω από το επίχρισμα διαφάνεια για δύο λεπτά για να διορθώσετε τα κύτταρα και αποφευχθεί η στρέβλωση της μορφολογίας τους . Air στεγνώσει το slide ή το θερμάνετε ελαφρά πάνω από χαμηλή φλόγα του καυστήρα Bunsen . Μετακινήστε το κλείστρο πίσω-και -εμπρός για να θερμάνει ομοιόμορφα και να αποφευχθεί η δημιουργία τοπικών hot spots . Εφαρμόστε τη θερμότητα ομοιόμορφα και με συνέπεια . Αποφύγετε να πάρετε το slide έξω από την φλόγα μέχρι να τελειώσετε τη θέρμανση του.
Η 4

Ρίξτε crystal violet αντιδραστήριο χρώσης πάνω από την σταθερή πλάκα. Αφήστε το να σταθεί για 30 έως 60 δευτερόλεπτα . Ξεπλύνετε το λεκέ με νερό της βρύσης για λίγα δευτερόλεπτα . Στραγγίστε την περίσσεια του νερού από τη διαφάνεια . Καλύψτε τη διαφάνεια με αντιδραστήριο χρώσης ιωδίου για 30 έως 60 δευτερόλεπτα . Πλύνετε το ιώδιο με νερό της βρύσης . Γείρετε τη διαφάνεια και προσθέστε μερικές σταγόνες αποχρωματιστικό . Εφαρμόστε μέχρι την απορροή είναι καθαρό . Πλύνετε τη διαφάνεια .
5

Απολαύστε τη διαφάνεια με ροζ χρώματος safranin αντιδραστήριο αντι- χρώση για 30 δευτερόλεπτα . Μπορείτε να αντικαταστήσετε βασική λύση φουκίνη για την safranin . Πλύνετε απαλά την πλάκα και το κούνημα του πλεονάζοντος νερού . Στεγνώστε το στεγνώνετε με απορροφητικό χαρτί και στη συνέχεια να στεγνώσει με τον αέρα τη διαφάνεια . Εξετάστε το έτοιμο διαφάνεια κάτω από ένα μικροσκόπιο εξοπλισμένο με μια πηγή φωτός . Ψάξτε για τον εντοπισμό και gram θετικά βακτήρια ράβδους με μπλε ή μοβ χρώμα από τη δοκιμή χρώση Gram .
Η
εικόνων